Domuzda Nitroimidazol Kalıntıları: Wanyi LCMS-TQ9200 LC-MS/MS Yöntemi GB 31658.23-2022'ye Göre Doğrulandı
2026-10-21
Nitroimidazoller, anaerobik bakterileri ve trikomonadları etkili bir şekilde inhibe eden sentetik antibakteriyel ve antiprotozoal ilaçlardır. Bir zamanlar hayvancılık ve su ürünleri yetiştiriciliğinde sindirim enfeksiyonlarını ve protozoal hastalıkları kontrol etmek, hayatta kalma oranlarını iyileştirmek için yaygın olarak kullanılmışlardır. Ancak ana ilaçlar ve metabolitleri belirgin şekilde toksiktir: hayvanlarda hızla çeşitli aktif metabolitlere metabolize olurlar ve bunların bazıları ana bileşikten çok daha uzun süre dokularda kalır.
Toksikolojik çalışmalar, nitroimidazol ana bileşiklerinin ve ana metabolitlerinin potansiyel olarak kanserojen, mutajenik ve genotoksik olduğunu göstermektedir. Hayvansal kaynaklı gıdalardaki kalıntılar gıda zinciri yoluyla insan vücuduna girer ve uzun süreli düşük doz alımı hematopoezi bozabilir, kromozomlara zarar verebilir ve gen mutasyonu riskini artırabilir. Bu nedenle Çin, gıda üreten hayvanlarda nitroimidazolleri yasaklamıştır ve hayvansal kaynaklı gıdalarda herhangi bir kalıntıya izin verilmemektedir, bu da gıda güvenliği için hassas kalıntı testlerini zorunlu kılmaktadır.
Sıvı kromatografisi tandem kütle spektrometrisi ile hayvansal kaynaklı gıdalardaki nitroimidazol kalıntıları için ulusal gıda güvenliği standardı olan GB 31658.23-2022, bu çalışmanın yasal dayanağıdır. Sığır, koyun ve diğer hayvan matrislerindeki ana ilaçları ve metabolitleri kapsar. Bir test laboratuvarı, düşük ppb seviyesinde, düşük taşıma ve uzun enjeksiyon dizileri boyunca kararlı hassasiyetle, tutulması ve iyonize edilmesi daha zor olan hidroksi metabolitler dahil olmak üzere dört hedef bileşik - metronidazol, hidroksimetronidazol, dimetridazol ve hidroksidimetridazol - için domuz eti üzerinde doğrulanmış bir iş akışına ihtiyaç duymuştur.
| Öğe | Yapılandırma |
|---|---|
| LC-MS/MS sistemi | Wanyi LCMS-TQ9200 üçlü kuadrupol |
| Analitik kolon | C18, 1.6 um, 2.1 x 100 mm |
| Mobil faz A | Sudaki %0.1 formik asit |
| Mobil faz B | Asetonitrildeki %0.1 formik asit |
| Akış hızı | 0.3 mL/dak |
| Kolon sıcaklığı | 40 derece C |
| Enjeksiyon hacmi | 4 uL |
| Yardımcı ekipman | Ultrasonik banyo, vorteks karıştırıcı, yüksek hızlı santrifüj, su banyosu, azot buharlaştırıcı, analitik terazi |
50 mL'lik bir santrifüj tüpüne 2 g numune tartın (0.05 g'a kadar hassasiyetle), 10 uL 1 ug/mL karışık iç standart çalışma solüsyonu ekleyin, 30 s vorteksleyin ve 10 dakika bekletin. 15 mL etil asetat ekleyin, 2 dakika vorteksleyin ve 5 dakika boyunca 10.000 rpm'de santrifüjleyin. Süpernatantı aktarın ve ek 15 mL etil asetat ile ekstraksiyonu bir kez daha tekrarlayın. Her iki ekstraktı birleştirin ve 25 derece C su banyosunda azot altında kuruyana kadar buharlaştırın.
Kalıntıyı 5 mL 0.1 mol/L hidroklorik asitte çözün, 1 dakika vorteksleyin, 5 mL n-heksan ekleyin, 1 dakika çalkalayın ve 5.000 rpm'de 5 dakika santrifüjleyin. Heksan tabakasını atın ve başka bir 5 mL heksan ile yağ giderme adımını bir kez daha tekrarlayın. Bir katı faz ekstraksiyon kartuşunu 3 mL 0.1 mol/L hidroklorik asit ve 3 mL metanol ile hazırlayın, sulu tabakayı yükleyin, 3 mL 0.1 mol/L hidroklorik asit ile yıkayın ve 4 mL metanol ile elüe edin. Elüatı 35 derecede azot altında kuruyana kadar buharlaştırın, 0.5 mL suda çözün, 1 dakika vorteksleyin ve enjeksiyondan önce filtreleyin.
| Parametre | Sonuç |
|---|---|
| Çalışma süresi | Dört analit artı iç standartlar 8 dakika içinde ayrıldı, simetrik pikler, güçlü yanıt |
| Doğrusallık | 2, 4, 20, 40, 200 ve 400 ug/L'de matris eşleştirilmiş kalibrasyon; tüm dört bileşik için R2 0.9995'in üzerinde, sapma %20 limitinin altında |
| LOD ve LOQ | 0.5 ug/kg'da sinyal-gürültü oranı 3'ün üzerinde ve 1 ug/kg'da 10'un üzerinde, 0.5 ug/kg LOD ve 1 ug/kg LOQ gereksinimlerini karşılıyor |
| Hassasiyet (n = 6) | 2 ng/mL'de %6'nın altında ve 20 ng/mL'de %3'ün altında RSD, %10'luk bir limite karşı |
| Taşıma | 400 ng/mL'lik en yüksek standarttan sonra boş enjeksiyon, LOQ tepe alanının %20'sinin çok altında |
| Spike kurtarma | 2 ng/mL'de %61.8 ila %103.35 ve 20 ng/mL'de %104.35 ila %107.15, %60 ila %120 gereksinimi dahilinde |
| Gerçek domuz eti numunesi | Dört nitroimidazolün hiçbiri tespit edilmedi |
Boş domuz eti ekstraktındaki matris eşleştirilmiş kalibrasyon, et matrisinden kaynaklanan iyon bastırmasını telafi eder ve iz seviyesinde nicemlemeyi güvenilir tutar. Pik şekilleri iyiydi ve kuyruklanma yoktu, bu da etil asetat ekstraksiyonu, heksan yağ giderme ve SPE temizliğinin 1 ug/kg'daki girişimleri ortadan kaldırdığını doğruluyor.
Wanyi LCMS-TQ9200 LC-MS/MS sistemi, GB 31658.23-2022 kapsamında domuz etindeki dört nitroimidazol kalıntısı için doğrulanmış bir yöntem sunmuştur. Simetrik pikler, 0.9995'in üzerindeki R2, %10 içindeki hassasiyet, ihmal edilebilir taşıma ve %60 ila %120 arasındaki kurtarma, iş akışının yasaklanmış veteriner ilaç taraması ve doğrulaması için rutin nitel ve nicel gereksinimleri karşıladığını ve gıda güvenliği risk izlemesi için güvenilir bir teknik temel sağladığını göstermektedir.
- Üçlü kuadrupol MRM alımı, yağlı bir et matrisinde 0.5 ug/kg'da yasaklanmış kalıntıları doğrulamak için gereken seçiciliği sağlar.
- 0.3 mL/dak'da 2.1 mm'lik bir kolon üzerindeki 2 um altı C18 kimyası, 8 dakikanın altında dört analiti, düşük solvent tüketimiyle çözer.
- İzotop etiketli iç standartlar, ekstraksiyon ve SPE sırasında meydana gelen kurtarma kayıplarını telafi eder ve partiler boyunca sonuçları stabilize eder.
- SPE'den önce heksan ile yağ giderme, kartuşu ve analitik kolonu korur, yüksek hacimli kalıntı laboratuvarlarında hizmet ömrünü uzatır.
