Nükleotid olarak, Üridin 5'-monofosfat (UMP), canlı organizmalarda nükleik asit metabolizmasında önemli bir ara maddedir. Memeli sütünde en bol bulunan nükleotiddir ve yavruların büyüme ve gelişimi sırasında üridilat için diyet gereksinimi diğer nükleotidlere göre önemli ölçüde daha yüksektir. Son yıllarda yapılan araştırmalar, UMP'nin sadece enerji metabolizmasına ve RNA sentezine katılmakla kalmayıp, aynı zamanda hücresel sinyal yollarını modüle ederek bağırsak bariyer fonksiyonunu da artırdığını ortaya koymuştur. Ayrıca, besin emilimini ve bağışıklık fonksiyonunu desteklemek için yağda çözünen vitaminlerle sinerjik olarak hareket eder. UMP, bebek mamalarına ve hayvan yemi/kümes hayvanı yemlerine besin takviyesi olarak yaygın olarak eklenir; burada saflığı ve konsantrasyonu, nihai ürünün besin değeri ve güvenliği üzerinde doğrudan etkiye sahiptir.
Anahtar Kelimeler:Gıda besin takviyesi, UMP, Nükleotidler, Yüksek performanslı sıvı kromatografisi.
1. Cihazlar ve Reaktifler
1.1 HPLC Konfigürasyon Listesi
Tablo 1 HPLC Konfigürasyon Listesi
| No. |
Modüler |
Adet |
| 1 |
LC3200 Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi |
1 |
| 2 |
P3210B İkili Yüksek Basınç Pompası |
1 |
| 3 |
CT3400 Kolon Fırını |
1 |
| 4 |
AS3210 Otomatik Örnekleyici |
1 |
| 5 |
UV3210 UV Dedektörü |
1 |
| 6 |
SmartLab CDS 2.0 İş İstasyonu |
1 |
| 7 |
Nova Element AQC18 5μm 4.6*250mm |
1 |
1.2 Reaktifler ve Standartlar
Tablo 2 Reaktifler ve Standartlar Listesi
| No. |
Reaktifler ve Standartlar |
Saflık |
| 1 |
5'-monofosfat |
%96.2 |
| 2 |
Üridin |
%98 |
| 3 |
Urasil |
%98 |
1.3 Deney Malzemesi ve Yardımcı Ekipmanlar
Ultrasonik Temizleyici
Vorteks Karıştırıcı
2. Deney Yöntemi ve Koşulları
Kromatografi Kolonu: Nova Element AQC18, 5μm 4.6x250mm.
3. Deney Sonucu
3.1 Sistem Uygunluk Testi
Sistem uygunluk testi, hedef tepe noktasının iyi şekilli olduğunu, yüksek teorik plaka sayısına sahip olduğunu ve yakınında parazit tepe noktası olmadığını göstererek tüm deneysel gereksinimleri karşılamıştır.
Şekil 1 Üridin 5'-Monofosfat Standart Çalışma Çözeltisinin Kromatogramı
Tablo 3 Üridin 5'-Monofosfat Standart Çalışma Çözeltisi için Test Sonuçları
| Bileşik |
Alıkonma Süresi (dak) |
Tepe Alanı (mAU*s) |
Tepe Yüksekliği |
Kuyruklanma Faktörü |
Teorik Plaka Numarası |
| UMP |
5.559 |
322.525 |
55.643 |
1.130 |
23689 |
3.2 Tekrarlanabilirlik Testi
Üridin 5'-Monofosfat (UMP) standart çalışma çözeltisi altı kez enjekte edildi. Alıkonma süresinin göreceli standart sapması (RSD) %0.085 ve tepe alanı %0.191 idi. Her iki değer de belirtilen %2.0 sınırının altında olup, deneysel gereksinimlere uygunluğu göstermektedir.
Şekil 2 Üridin 5'-Monofosfat (UMP) Tekrarlanabilirlik Testinin Kromatogramları
Tablo 4 Üridin 5'-Monofosfat (UMP) için Tekrarlanabilirlik Test Sonuçları
| Bileşik |
Alıkonma Süresi(dak) |
Tepe Alanı(mAU*s) |
| Üridin 5'-Monofosfat |
5.559 |
322.525 |
| 5.559 |
323.013 |
| 5.559 |
323.958 |
| 5.561 |
322.753 |
| 5.568 |
323.072 |
| 5.569 |
322.141 |
| RSD(%) |
0.085 |
0.191 |
3.3 Örnek Testi
5'-üridin monofosfat standart çalışma çözeltisinin (20mg/L) tepe alanı 322.525 iken, test numune çözeltisinin tepe alanı 274.211 idi. Dış standart yöntemine göre, numunedeki UMP içeriği 17mg/L olarak belirlendi.
Şekil 3 Test Numunesinin Kromatogramı
Tablo 5 Örnek Test Sonuçları
| Bileşik |
Alıkonma Süresi(dak) |
Tepe Alanı(mAU*s) |
Tepe Yüksekliği |
SNR |
Teorik Plaka Numarası |
| 5'-üridin monofosfat |
5.568 |
274.211 |
47.321 |
14710.024 |
24266 |
3.4 İlgili Maddeler İçin Sistem Uygunluk Testi
İlgili maddeler için sistem uygunluk çözeltisi testi, tüm bileşik tepe noktalarının iyi şekilli olduğunu, yüksek teorik plaka sayılarına ve 2.0'dan büyük çözünürlüğe sahip olduğunu göstererek deneysel gereksinimleri karşılamıştır.
Şekil 4 5'-üridin Monofosfat (UMP) Standart Çalışma Çözeltisinin Kromatogramı
Tablo 6 5'-üridin Monofosfat (UMP) Standart Çalışma Çözeltisi için Test Sonuçları
| Bileşik |
Alıkonma Süresi(dak) |
Tepe Alanı(mAU*s) |
Tepe Yüksekliği |
Kuyruklanma Faktörü |
Teorik Plaka Numarası |
| 5'-üridin Monofosfat |
5.570 |
326.631 |
8.682 |
1.121 |
24708 |
| Urasil |
7.097 |
839.625 |
28.844 |
1.033 |
18284 |
| Üridin |
17.367 |
446.693 |
n.a. |
0.995 |
19136 |
3.5 Numune Tekrarlanabilirlik Testi
Sistem uygunluk çözeltisinin altı ardışık enjeksiyonundan sonra, 5'-UMP, urasil ve üridin için alıkonma süresi tekrarlanabilirliği sırasıyla %0.031, %0.058 ve %0.102 iken, tepe alanı tekrarlanabilirliği sırasıyla %0.243, %0.134 ve %0.134 olup, deneysel gereksinimleri karşılamaktadır.
Şekil 5 Numune Tekrarlanabilirlik Testinin Kromatogramı
Tablo 7 İlgili Maddelerin Alıkonma Süresi Tekrarlanabilirliği için Test Sonuçları
| Bileşik |
5'-üridin Monofosfat |
Urasil |
Üridin |
| Alıkonma Süresi (dak) |
5.570 |
7.097 |
17.367 |
| 5.573 |
7.092 |
17.371 |
| 5.571 |
7.089 |
17.360 |
| 5.570 |
7.093 |
17.380 |
| 5.570 |
7.091 |
17.363 |
| 5.574 |
7.100 |
17.048 |
| RSD (%) |
0.031 |
0.058 |
0.102 |
Tablo 8 İlgili Maddelerin Tepe Alanı Tekrarlanabilirliği için Test Sonuçları
| Bileşik |
5'-üridin Monofosfat |
Urasil |
Üridin |
| Tepe Alanı |
326.631 |
839.625 |
446.693 |
| 326.175 |
841.410 |
447.261 |
| 326.126 |
841.330 |
447.299 |
| 327.412 |
842.394 |
448.319 |
| 327.832 |
841.747 |
447.324 |
| 327.850 |
842.911 |
448.083 |
| RSD (%) |
0.243 |
0.134 |
0.134 |
3.6 İlgili Maddeler İçin Hassasiyet Testi
İlgili maddeler için hassasiyet test çözeltisindeki 5'-UMP ana tepe noktasının sinyal-gürültü oranı 3'ten önemli ölçüde yüksek olup, deneysel gereksinimleri karşılamaktadır.
Şekil 6 İlgili Maddeler Hassasiyet Test Çözeltisinin Kromatogramı
Tablo 9 İlgili Maddeler Hassasiyet Çözeltisinin Test Sonuçları
| Bileşik |
Alıkonma Süresi(dak) |
Tepe Alanı(mAU*s) |
Tepe Yüksekliği |
SNR |
Teorik Plaka Numarası |
| 5'-üridin Monofosfat |
5.573 |
26.797 |
4.638 |
949.156 |
24519 |
3.7 İlgili Maddeler Referans ve Numune Çözeltilerinin Test Edilmesi
Referans çözeltisinin (17 mg/L) tepe alanı 275.856 idi. Test çözeltisindeki, 5'-üridin monofosfat hariç, safsızlıkların toplam tepe alanı 38.021 idi. Dış standart yöntemi ile hesaplama, numunedeki safsızlık içeriği 2.343mg/L'dir.
Şekil 7 İlgili Maddeler Referans Çözeltisi Testinin Kromatogramı
Tablo 10 İlgili Maddeler Referans Çözeltisinin Test Sonuçları
| Bileşik |
Alıkonma Süresi(dak) |
Tepe Alanı(mAU*s) |
Tepe Yüksekliği |
SNR |
Teorik Plaka Numarası |
| 5'-üridin Monofosfat |
5.572 |
275.856 |
47.414 |
14576.232 |
24512 |
Şekil 8 İlgili Maddeler Numune Çözeltisi Testinin Kromatogramı
Tablo 11 İlgili Numune Çözeltisi için Test Sonuçları
| Bileşikler |
Alıkonma Süresi (dak) |
Tepe Alanı (mAU*s) |
Tepe Yüksekliği |
SNR |
Teorik Plaka Numarası |
| 1 |
3.847 |
7.952 |
1.412 |
433.935 |
114734.178 |
| 2 |
4.178 |
4.358 |
0.710 |
218.248 |
11310 |
| 5'-üridin Monofosfat |
5.548 |
12576.642 |
1964.994 |
603778.520 |
196687.093 |
| Urasil |
7.093 |
218.727 |
26.939 |
8277.393 |
18342 |
| Üridin |
17.355 |
2810.366 |
145.230 |
44624.340 |
19058 |
4. Sonuç
Bu deneyde, "GB 1903.69-2024 Ulusal Gıda Güvenliği Standardı: Gıda Besin Artırıcı 5'-Üridin Monofosfat" referans alınarak, bir ultraviyole dedektörlü bir Wayeal LC3200 yüksek performanslı sıvı kromatografi sistemi kullanılarak analiz yapılmıştır. Deneysel sonuçlar, sistem uygunluk testinin tüm bileşikler için iyi tepe şekilleri, yüksek teorik plaka sayıları ve 2.0'ın üzerinde çözünürlük gösterdiğini ve deneysel gereksinimleri karşıladığını göstermektedir. 5'-Üridin Monofosfat standart çalışma çözeltisi ve ilgili maddeler için alıkonma süresi tekrarlanabilirliği %0.2'nin altında ve tepe alanı tekrarlanabilirliği %0.3'ün altında olup, iyi bir tekrarlanabilirlik göstermektedir. İlgili maddeler için hassasiyet test çözeltisi, 5'-Üridin Monofosfat ana tepe noktasının sinyal-gürültü oranının 3'ten önemli ölçüde yüksek olduğunu göstererek, deneysel gereksinimleri karşılamaktadır. Tüm numune test sonuçları normaldi. Yukarıdaki veriler, standart yöntemde belirtilen cihaz gereksinimlerini karşılamaktadır.
Mesajınız 20-3.000 karakter arasında olmalıdır!
