Panax Notoginseng Saponinlerindeki reçine kalıntılarının Wayeal Gaz Kromatografı GC6100 ile belirlenmesi

Gaz kromatografisi, Panax notoginseng saponinlerindeki reçine kalıntılarının tespitinde kritik öneme sahip bir rol oynar. Panax notoginsengsaponinler, Xueshuantong gibi kardiyovasküler ve serebrovasküler ilaçlar için temel hammadde görevi görür ve bunların saflaştırma prosesinde genellikle makro gözenekli adsorpsiyon reçineleri kullanılır. Ancak bu işlem, n-heksan, benzen, toluen, ksilen, stiren ve divinilbenzen dahil olmak üzere zararlı organik solvent kalıntılarının ortaya çıkmasına neden olabilir. Bu kalıntılar insan vücudu için potansiyel olarak toksiktir; bu nedenle sıkı izleme için hassas ve doğru analitik yöntemlerin oluşturulması önemlidir.

Bu çalışma, Çin Farmakopesi'nin en son baskısına uygun olarak, Panax notoginseng saponin numunelerindeki reçine kalıntılarının belirlenmesi için alev iyonizasyon detektörü (FID) ile donatılmış ve otomatik bir headspace örnekleyici ile birleştirilmiş Wayeal Technology GC6100 gaz kromatografı kullanılarak gerçekleştirildi.

Anahtar Kelimeler: Panax notoginseng saponinler; artık çözücüler; gaz kromatografisi; FID dedektörü; kafa boşluğu.

1. Deney Yöntemi

1.1 Cihaz Yapılandırması

Tablo 1 Gaz Kromatografının Yapılandırma Listesi

1.2 Deneysel Malzemeler ve Yardımcı Ekipmanlar

Referans standartları: n-heksan, benzen, toluen, p-ksilen, o-ksilen, stiren, 1,2-dietilbenzen ve divinilbenzen standart çözeltilerinden (şirket içi satın alınan) sertifikalı referans malzemeleri, buzdolabında ve ışıktan korunarak kapalı kaplarda saklanır;

N,N-dimetilformamid;

Taşıyıcı gaz: Yüksek saflıkta nitrojen;

Hidrojen jeneratörü;

Hava jeneratörü;

Otomatik üst boşluk örnekleyici;

Headspace şişeleri: Cam headspace şişeleri (20 mL).

1.3 Test Koşulları

1.3.1 Headspace Örnekleyici için Referans Koşulları

Fırın sıcaklığı: 90°C;

Kuluçka süresi: 30 dakika;

Enjeksiyon valfi sıcaklığı: 110°C;

Transfer hattı sıcaklığı: 120°C;

Enjeksiyon hacmi: 1,0 mL (döngü hacmi).

1.3.2 Gaz Kromatografisi için Referans Çalışma Koşulları

Analitik sütun: FFAP kılcal sütunu, 30m×0,25 mm×0,25μM

Sıcaklık programı: Başlangıç ​​kolon sıcaklığı 60°C 16 dakika tutuldu, ardından 200'e yükseltildi°C 20 oranında°C/dak ve 2 dakika tutuldu;

Sütun akış hızı: 1,0 mL/dak;

Giriş sıcaklığı: 240°C;

Dedektör sıcaklığı: 300°C;

Hava akış hızı: 300 mL/dak;

Hidrojen akış hızı: 40 mL/dak;

Makyaj akış hızı: 20 mL/dak;

2:1 bölünmüş oranlı bölünmüş enjeksiyon.

1.4 Çözelti Hazırlama

1.4.1 Referans Standart Stok Çözeltisinin Hazırlanması

N-heksan, benzen, tolüen, p-ksilen, o-ksilen, stiren, 1,2-dietilbenzen ve divinilbenzenin referans standartlarından uygun miktarlarda doğru bir şekilde tartın ve 20 ml içeren bir çözelti hazırlamak için N,N-dimetilformamid içinde çözün.μn-heksan, toluen, p-ksilen, o-ksilen, stiren, 1,2-dietilbenzen ve divinilbenzenin her biri g/mL ve 4μReferans standart stok çözeltisi olarak görev yapan sırasıyla g/mL benzen.

1.4.2 Karma Standart Çalışma Solüsyonunun Hazırlanması

2 mL referans standart stok çözeltisini 50 mL'lik ölçülü bir şişeye doğru bir şekilde aktarın, %25 N,N-dimetilformamid çözeltisiyle hacme kadar seyreltin ve iyice karıştırın. Bu çözeltinin 5 mL'sini 20 mL'lik bir headspace şişesine doğru bir şekilde aktarın, kapatın ve karışık standart çalışma çözeltisi elde edilir.

1.4.3 Saptama Sınırı Testi için Standart Çözümün Hazırlanması

2 mL referans standart stok çözeltisini 500 mL'lik ölçülü bir şişeye doğru bir şekilde aktarın, %25 N,N-dimetilformamid çözeltisiyle hacme kadar seyreltin ve iyice karıştırın. Bu çözeltinin 5 mL'sini 20 mL'lik bir headspace şişesine doğru bir şekilde aktarın, kapatın ve tespit limiti testi için standart çözelti elde edilir.

2. Sonuç ve Tartışma

2.1 Referans Standartların Niteliksel Analizi

Şekil 1 Kör Çözücünün Kromatogramı

Şekil 2 Karma Standart Çalışma Çözeltisinin Kromatogramı

Tablo 2 Karma Standart Çalışma Solüsyonunun Kromatografik Parametreleri

Not: Yukarıdaki kromatogramlar, tüm kromatografik tepe noktalarının, 1,5'tan büyük çözünürlüklerle, deneysel analiz gerekliliklerini karşılayarak birbirinden iyi şekilde ayrıldığını göstermiştir.

2.2 Tekrarlanabilirlik Testi

Şekil 3 Tekrarlanabilirlik Testi için Karma Standart Çalışma Çözümünün Yerleştirilmiş Kromatogramları (n=5)

Tablo 3 Tekrarlanabilirlik Testi için Karma Standart Çalışma Çözümünün Kromatografik Parametreleri

Not: Karışık standart çalışma solüsyonu 5 kez sürekli olarak enjekte edildi ve zirve alanların RSD'si hesaplandı.≤%1,5.

2.3 Tespit Limiti

Şekil 4 Saptama Sınırı Testi için Standart Çözümün Kromatogramı

Tablo 4 Saptama Sınırı Testi için Standart Çözümün Kromatografik Parametreleri

Not: Tespit sınırı (LOD), sinyal-gürültü oranı (S/N) 3 olarak belirlendi ve nicelik sınırı (LOQ), sinyal-gürültü oranı (S/N) 10 olarak belirlendi. Hem LOD hem de LOQ değerlerinin standardın gerekliliklerini karşıladığı görüldü.

2.4 Örnek Analizi

Her bir numunenin yaklaşık 0,1 gramını (sırasıyla 0,1017 g, 0,1026 g ve 0,1023 g) ayrı 20 mL'lik headspace şişelerine doğru bir şekilde tartın, ardından her bir şişeye 5 mL %25 N,N-dimetilformamid çözeltisini doğru bir şekilde ekleyin, kapatın ve karıştırmak için iyice çalkalayın.

Şekil 5 Üç Örnek Çözeltinin Yerleştirilmiş Kromatogramları

Şekil 6 Örnek Çözelti ve Referans Standart Çözeltisinin Yerleştirilmiş Kromatogramları

Not: Numunelerde n-heksan, benzen, tolüen, p-ksilen, o-ksilen, stiren, 1,2-dietilbenzen veya divinilbenzenin hiçbiri tespit edilmedi.

3. Sonuç

Bu çalışmada, Panax notoginseng saponin örneklerinde reçine kalıntılarının belirlenmesi için alev iyonizasyon detektörü (FID) ile donatılmış ve otomatik bir headspace örnekleyici ile birleştirilmiş bir Wayeal GC6100 gaz kromatografisi kullanıldı. Deney sonuçları, tüm kromatografik tepe noktalarının, 1,5'tan büyük çözünürlüklerle iyi bir şekilde ayrıldığını ve analitik amaçların gerekliliklerini karşıladığını gösterdi. Bu yöntemin tekrarlanabilirlik ve tespit limiti test sonuçlarının tümü belirtilen gereksinimleri karşıladı. Test numunelerinde n-heksan, benzen, toluen, p-ksilen, o-ksilen, stiren, 1,2-dietilbenzen veya divinilbenzenin hiçbiri tespit edilmedi, bu da tatmin edici sonuçlara işaret ediyor. Bu sonuçlar, Wayeal GC6100 gaz kromatografi cihazının, Panax notoginseng saponin örneklerinde reçine kalıntılarının belirlenmesine yönelik analitik gereklilikleri tamamen karşılayabildiğini göstermektedir.

4. Dikkat

Çözücü ve standart çözeltilerin hazırlanmasının yanı sıra numune ön işlemesini içeren tüm işlemler çeker ocakta gerçekleştirilmelidir. Cilt ve giysilerle teması önlemek için laboratuvar güvenlik düzenlemelerine uygun olarak uygun kişisel koruyucu ekipman giyilmelidir.