Wayeal'in Yüksek Performanslı Sıvı Hromatografi ile Beslenmede Metiyonin Hidroksi Analogunun Belirlenmesi

Metiyonin Hidroksi Analoğu (MHA), metyonin yerine yem endüstrisinde yaygın olarak kullanılan organik asit katkı maddesidir.Domuzlar (domuzlar ve bitirme domuzları)Metyoninin yerine geçerek yem maliyetlerini azaltmada önemli etkiler göstermektedir.Hayvanların bağırsak ortamını iyileştirmek, ve hayvanların bağışıklığını arttırır.

Yüksek performanslı sıvı kromatografi, UV tespiti ile birlikte, mükemmel ayrım verimliliği nedeniyle çeşitli karmaşık yem örneklerinin analizi için çok uygundur.güçlü matris müdahale direnci, yüksek algılama duyarlılığı ve istikrarlı ve güvenilir niceliksel sonuçlar.Bu deney, "Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi ile Beslenmede Metiyonin Hidroksi Analogunun Belirlenmesi" standardına (GB/T 19371-2025) uygun olarak gerçekleştirildi.. A Wayeal LC3400 series high performance liquid chromatograph equipped with a UV detector was employed to validate the sample pretreatment procedure and the liquid chromatographic separation and detection system, hem kalite tespitini hem de metyonin hidroksi analogunun çeşitli yem numunelerinde hassas miktarsal analizini sağlar.

Anahtar kelimeler: yem; metionin hidroksit analog; yüksek performanslı sıvı kromatografi.

1. Araçlar ve Reaktörler

1.1 HPLC Yapılandırma Listesi

Tablo 1 Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi Sistemi Yapılandırma Listesi

1.2 Rejanlar ve Referans Standartları Listesi

Tablo 2 Rejanlar ve Referans Standartları Listesi

1.3 Sıvı kromatografi koşulları

Tablo 3 Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi Koşulları

1.4 Deney malzemeleri ve yardımcı ekipmanlar

Ultrasonik temizleyici;

Vorteks karıştırıcı;

Yüksek hızlı santrifüj;

Analiz dengesi;

Şaker.

2Deneyim Yöntemi

2.1 Çözüm Hazırlama

2.1.1 Standart eğri çözümleri:

Metyonin Hidroksi Analog standardının uygun miktarını doğru bir şekilde tartın ve % 10 asetonitrilde çözün, böylece 0 kitlesel konsantrasyonlarda bir dizi standart çözeltme hazırlayın.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0- 20 dolar.0- 40 yaşında.0, ve 80.0μHer standart çözeltinin 5 ml'ünü 15 ml'lik tıkalı test tüplerine ayrı ayrı aktarın. %50 potasyum hidroksit çözeltisinin 0,1 ml'ini doğru bir şekilde ekleyin ve 15 saniye boyunca girdap yapın.Sonra 0'yu doğru bir şekilde ekleyin.%50 fosforik asit çözeltisinin.2 ml'si ve 15 saniye daha girdap. 8000 r/dakikada 5 dakika santrifuge. Analizden önce supernatant'ı mikroporozlu bir membran filtresinden geçirin.

2.1.2 Deneme Örneği Çözümleri:

5g yem örneğini bir kapta tartın, 50mL% acetonitril çözeltisi ekleyin ve 30 saniye karıştırın. Bir sallayıcının üzerine koyun ve 30 dakika sallayın. 8000r/dakikada 5 dakika santrifuge edin.ve daha sonra kullanmak için supernatant tutmak. Yukarıdaki süpernatantın 5 ml'ini 15 ml'lik kapalı bir test tüpüne doğru bir şekilde aktarın. %50 potasyum hidroksit çözeltisinin ve 15 saniye boyunca girdapın 0.1 ml'ini doğru bir şekilde ekleyin. Daha sonra doğru bir şekilde 0.%50 fosforik asit çözeltisi 2mL ve 15 saniye daha girdap8000 r/min hızında 5 dakika santrifüj yapılır. Analizden önce supernatant'ı mikroporozlu bir membran filtresinden geçirilir. İki paralel test örneği çözeltisi hazırlanır.

2.1.3 Geri kazanım test çözümleri:

Örnek süpernatantının 2,5 ml'sini ve her standart seri çözeltisinin 2,5 ml'sini 15 ml'lik tıkalı bir test tüpüne doğruca aktarın.% 50 potasyum hidroksit çözeltisi ve 15 saniye boyunca girdap 1 mlDaha sonra %50 fosforik asit çözeltisi ve girdap 0.2mL'ye doğru bir şekilde ekleyin ve 15 saniye daha fırlatın. 8000 r/min hızında 5 dakika santrifüj yapın.Analizden önce supernatant'ı mikroporozlu bir membran filtresinden geçirin.

3Deneyin sonucu.

3.1 Doğruluk ve Aralık

Tablo 4 Standart eğri konsantrasyon tablosu

Şekil 1 Metyonin Hidroksi Analogunun Standart Eğri

Not: Metyonin Hidroksi Analoğu referans standart çözeltisinden uygun miktarlarda alınmış ve standart eğriyi hazırlamak için seri olarak bir dizi konsantrasyonlara kadar seyreltilmiştir.Doğruluk aralığı 0 idi..5- Evet.80.0μg/mL ve korelasyon katsayısı (R) 0 idi.99983, analite için mükemmel bir doğrusallık gösterir.

3.2 Kesinlik

Şekil 2 Referans Standartı için hassasiyet testi üst üste örtülü kromatogramlar (20.0μg/mL)

Tablo 5 Referans Standartı için hassasiyet testi verileri (20.0μg/mL)

Not: Metyonin Hidroksi Analoğu'nun referans standardı (20'lik bir konsantrasyonda).0μGeri dönüştürülebilirlik (RSD) tutma süresi% 0,084 ve zirve alanı% 0,391 idi, bu da iyi bir enstrüman hassasiyetini gösterir.

3.3 Geri kazanma

Şekil 3 Yemdeki metiyonin hidroksi analogunun geri kazanım testinin üst üste yerleştirilmiş kromatogramları

Tablo 6 Yemdeki metionin hidroksi analoğu için geri kazanım testi verileri

Not: Örnek, referans standardı ile 40 konsantrasyonunda karıştırıldı.0μG/ml ve yukarıda açıklanan prosedürle analiz edildi. elde edilen geri kazanım %88,56'dır.

3.4 Bulma sınırı (LOD)

Şekil 4 Metyonin Hidroksi Analog Standartının Kromatogramı (2.5μg/mL)

Tablo 7 Metyonin Hidroksi Analog Referans Standartı için Test Verileri (2.5μg/mL)

Not: Yukarıdaki tabloda gösterildiği gibi 2,5μg/mL'de methionine hidroxi analogu referans standardının test verilerine dayanarak, teorik algılama sınırı (LOD) 0 olarak hesaplandı.033μg/mL sinyal-gürültü oranı 3 (S/N = 3).

3.5 Bir yem örneğinin test edilmesi

Şekil 5 Bir yem örneğinin kromatogramı

Not: Metyonin Hidroksi Analoğu, bir yem örneğinde 0'luk bir konsantrasyonda tespit edildi.402μg/mL.

4Sonuç.

Bu deney, "Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi ile Besinlerde Metyonin Hidroksi Analogunun Belirlenmesi" standardına (GB/T 19371-2025) uygun olarak gerçekleştirildi.UV dedektörü ile donatılmış Wayeal LC3400 serisi yüksek performanslı sıvı kromatograf kullanılarakDeneysel sonuçlar, hedef zirvenin iyi bir simetri ve yüksek teorik plaka sayısını gösterdiğini gösterdi.5- Evet.80.0μg/mL, korelasyon katsayısı (R) 0'dan üstündü.9998MHA referans standardının tutma süresi ve zirve alanı için RSD değerleri (20.0μMHA'nın besin örneklerindeki geri kazanımı 40'a yükseldi.0μMHA için teorik algılama sınırı (LOD) 0 olarak belirlendi.033μMHA, bir yem örneğinde 0'luk bir konsantrasyonda başarıyla tespit edildi.402μTüm yukarıdaki veriler, farmakopey yönteminin enstrüman performansı için gereksinimlerini karşılar.