Bu uygulama notu, yem katkı maddelerindeki guanidinoasetik asit ve ilgili safsızlıkların belirlenmesi için Wayeal iyon kromatografi sisteminin kullanımını açıklamaktadır. Yem katkı maddelerinin temel işlevi, iz seviyede takviye yoluyla yem performansını artırmak ve hayvancılık üretim verimliliğini yükseltmektir.
Yem katkı maddelerinin bileşimi, güvenlik, etkinlik ve mevzuata uygunluğu sağlamak için son derece sıkı bir kontrole tabidir. Ürün talimatlarına ve hayvan beslenme gereksinimlerine dayalı hassas oranlarla, belirlenmiş standartlara sıkı sıkıya uygun olarak eklenmelidirler. Aşırı ekleme toksisiteye yol açabilirken, yetersiz ekleme etkisiz hale getirir. Herhangi bir maddenin yasa dışı eklenmesi kesinlikle yasaktır.
Yemler ve Yem Katkı Maddeleri Yönetmeliği'ne göre, hormonların, onaylanmamış kimyasal maddelerin ve veteriner ilaç hammaddelerinin doğrudan eklenmesi kesinlikle yasaktır. Yemlerin kalite kontrolü, hem hammaddelerin hem de bitmiş ürünlerin test edilmesiyle sağlanır. Doğru içerik belirlemesi, işletmeler için teknik veri desteği sağlar.
Anahtar Kelimeler: İyon kromatografisi, UV dedektörü, Yem katkı maddeleri.
1. Cihaz ve Reaktifler
1.1 İyon Kromatografı Yapılandırma Listesi
Tablo 1 Cihaz Yapılandırma Listesi
|
No.
|
Modüler
|
Adet
|
| 1 |
UV Dedektörlü IC6200 Serisi İyon Kromatografi Sistemi |
1 |
| 2 |
AS3100 Otomatik Numuneleyici |
1 |
| 3 |
SmartLab CDS 2.0 Kromatografi İş İstasyonu |
1 |
| 4 |
MS-5C-P2, 4.6×250 mm |
1 |
1.2 Reaktifler ve Standartlar
Tablo 2 Reaktifler ve Standartlar Listesi
|
No.
|
Reaktifler / Standartlar
|
Saflık
|
| 1 |
Guanidinoasetik Asit (GAA) Sıvı Standartları |
507.03 mg/L |
| 2 |
Siyanimid Sıvı Standartları |
1081.29 mg/L |
| 3 |
Disiyanidiamid Sıvı Standartları |
1107.72 mg/L |
| 4 |
Glisin Sıvı Standartları |
1344.10 mg/L |
1.3 Deney Malzemesi ve Yardımcı Ekipmanlar
Önceden Doldurulmuş Şırınga Filtresi, Hidrofilik, 0.45μm
Şırınga (20mL)
2. Deney Yöntemi
2.1 Numune Ön İşlemi
Kurutulmuş numuneden 0.2 gr hassas bir şekilde tartılarak 250 mL'lik bir behere alınır. 100 mL ultra saf su eklenir ve beher 30 dakika ultrasonik banyoya konulur. Bu ekstraksiyon işlemi 3 ila 4 kez tekrarlanır. Birleştirilmiş ekstrakt, nicel olarak 1000 mL'lik bir balon jojeye aktarılır, ultra saf su ile işarete kadar seyreltilir ve iyice karıştırılır. Hazırlanan numune çözeltisi hem seyreltilmeden hem de 10 kat seyreltildikten sonra kullanılır. Her çözeltiden uygun bir kısım, analiz için cihaza enjekte edilmeden önce 0.22 μm'luk bir membran filtreden geçirilir.
2.2 Deney Koşulu
Tablo 3 Kromatografik Koşul
| Kromatografik Kolon |
MS-5C-P2, 4.6 × 250 mm |
| Elüent |
8–35 mM MSA gradyan elüasyonu |
| Akış Hızı |
1mL/dak |
| Çalışma Süresi |
60dk |
| Enjeksiyon Hacmi |
10μL |
| Kolon Sıcaklığı |
40 °C |
| Hücre Sıcaklığı |
45 °C |
| Dalga Boyu |
200nm |
3. Deney Sonucu
3.1 Standartlar Kromatogramı
Analiz 60 dakika içinde tamamlanmış olup, iyi bir doğrusallık ve mükemmel doğrusal tekrarlanabilirlik göstermektedir. Tespit (LOD) ve miktar tayini (LOQ) limitleri mükemmeldir ve numune tekrarlanabilirliği tatmin edicidir, test gereksinimlerini karşılamaktadır.
Şekil 1 Kalibrasyon Standartlarının Üst Üste Bindirilmiş Kromatogramları
3.2 Doğrusal Aralık
Kalibrasyon eğrilerini oluşturmak için standart çözeltilerin uygun hacimleri alınmış ve seyreltilmiştir. Doğrusallık testi sonuçlarının bilinen konsantrasyonlardan sapması, izin verilen maksimum sapma dahilindedir. Tüm analitler için korelasyon katsayısı (R) 0.999'un üzerinde olup, mükemmel doğrusallık göstermektedir.
Tablo 4 Her Analit İçin Doğrusal Aralıklar
|
Analit
|
Doğrusal Aralık
|
Korelasyon Katsayısı (R)
|
| Guanidinoasetik Asit |
10–100mg/L |
0.99994 |
| Siyanimid |
2.5–80mg/L |
0.99996 |
| Disiyanidiamid |
0.1–1mg/L |
0.99919 |
| Glisin |
5–100mg/L |
1.00000 |
Şekil 2 Her Analit İçin Doğrusallık Sonuçları
3.3 Doğrusallık Tekrarlanabilirlik Testi
Şekil 3 Tekrarlanabilirlik Testi İçin En Düşük Kalibrasyon Standardının (S1) 8 Ardışık Enjeksiyonunun Üst Üste Bindirilmiş Kromatogramları.
Şekil 4 Tekrarlanabilirlik Testi İçin Orta Nokta Kalibrasyon Standardının (S3) 8 Ardışık Enjeksiyonunun Üst Üste Bindirilmiş Kromatogramları
Şekil 5 Tekrarlanabilirlik Testi İçin En Yüksek Kalibrasyon Standardının (S7) 8 Ardışık Enjeksiyonunun Üst Üste Bindirilmiş Kromatogramları
Tablo 5 Kalibrasyon Eğrisi Tekrarlanabilirlik Test Verileri
|
Bileşik
|
Kalibrasyon Noktası
|
Tutunma Süresi(dak) RSD (%)
|
Tepe Alanı (μS*s) RSD (%)
|
| Guanidinoasetik Asit |
S1 |
0.282 |
0.28 |
| S3 |
0.22 |
0.754 |
| S6 |
0.284 |
0.28 |
| Siyanimid |
S1 |
0.268 |
0.143 |
| S3 |
0.257 |
0.046 |
| S6 |
0.352 |
0.118 |
| Disiyanidiamid |
S1 |
0.811 |
0.396 |
| S3 |
0.706 |
0.043 |
| S6 |
0.906 |
0.027 |
| Glisin |
S1 |
0.221 |
0.263 |
| S3 |
0.171 |
0.101 |
| S6 |
0.232 |
0.035 |
3.4 Tespit Limiti (LOD) Testi
Şekil 6 Guanidinoasetik Asit İçin Tespit Limiti Testinin Kromatogramı
Tablo 6 Guanidinoasetik Asit İçin Tespit Limiti (LOD) ve Miktar Tayini Limiti (LOQ) Test Verileri
|
Bileşik
|
Konsantrasyon(mg/L)
|
Sinyal-Gürültü Oranı (S/N)
|
Tepe Yüksekliği (μS)
|
Gürültü (μS)
|
Teorik LOD (mg/L)
|
Teorik LOQ (mg/L)
|
| Guanidinoasetik Asit |
0.01 |
34.844 |
0.124 |
0.007 |
0.001 |
0.003 |
3.5 Safsızlıklar İçin LOD ve LOQ Testi
Şekil 7 Safsızlıklar İçin LOD ve LOQ Testi
Tablo 7 Safsızlıklar İçin LOD ve LOQ Test Verileri
|
Bileşik
|
Konsantrasyon (mg/L)
|
Sinyal-Gürültü Oranı
|
Tepe Yüksekliği (μS)
|
Gürültü (μS)
|
Teorik LOD (mg/L)
|
Teorik LOQ (mg/L)
|
| Siyanimid |
0.25 |
20.436 |
0.057 |
0.006 |
0.037 |
0.122 |
| Disiyanidiamid |
0.05 |
74.434 |
0.206 |
0.006 |
0.002 |
0.007 |
| Glisin |
2 |
27.124 |
0.075 |
0.006 |
0.221 |
0.737 |
3.6 Numune İçeriği ve Tekrarlanabilirlik Testi Kromatogramları
Şekil 8 Seyreltilmemiş Yem Katkı Maddesi Numunesinin 8 Ardışık Enjeksiyonunun Kromatogramları
Tablo 8 Seyreltilmemiş Yem Katkı Maddesi Numunesi İçin Test Verileri
|
Numune Adı
|
Analit
|
Numune Ağırlığı (g)
|
Son Hacim (mL)
|
Sonuç (mg/L)
|
İçerik (g/kg)
|
Tutunma Süresi RSD (%)
|
Tepe Alanı (μS·s) RSD (%)
|
| Yem Katkı Maddesi |
Siyanimid |
0.2 |
1000 |
Tespit Edilmedi |
Tespit Edilmedi |
/ |
/ |
| Disiyanidiamid |
0.2 |
1000 |
0.099 |
0.495 |
0.397 |
0.44 |
| Glisin |
0.2 |
1000 |
Tespit Edilmedi |
Tespit Edilmedi |
/ |
/ |
Şekil 9 10 Kat Seyreltilmiş Yem Katkı Maddesi Numunesinin 8 Ardışık Enjeksiyonunun Kromatogramları
Tablo 9 10 Kat Seyreltilmiş Yem Katkı Maddesi Numunesi İçin Test Verileri
|
Numune Adı
|
Analit
|
Numune Ağırlığı (g)
|
Son Hacim (mL)
|
Seyreltme Faktörü
|
Sonuç (mg/L)
|
İçerik (g/kg)
|
Tutunma Süresi RSD (%)
|
Tepe Alanı (μS·s) RSD (%)
|
| 10 Kat Seyreltilmiş Yem Katkı Maddesi Numunesi |
Guanidinoasetik Asit |
0.2 |
1000 |
10 |
18.61 |
930.5 |
0.083 |
0.637 |
4. Sonuç
Bu çalışmada, yem katkı maddelerindeki guanidinoasetik asit ve ilgili safsızlıkların içeriğini belirlemek için bir Wayeal iyon kromatografi sistemi kullanılmıştır. Bu yöntem, yem katkı maddelerindeki hedef analitlerin doğru bir şekilde miktarının belirlenmesini sağlar ve eklemelerinin Yemler ve Yem Katkı Maddeleri Yönetmeliği'ne uyup uymadığını doğrulayabilir. Analit içeriği üzerinde hassas kontrol sağlayarak, bu yöntem işletmeler için teknik veri desteği sunmaktadır.
Mesajınız 20-3.000 karakter arasında olmalıdır!
english
français
Deutsch
Italiano
Русский
Español
português
Nederlandse
ελληνικά
日本語
한국
العربية
हिन्दी
Türkçe
indonesia
tiếng Việt
ไทย
বাংলা
فارسی
polski
