Tavuk Etinde Wayeal LCMS-TQ9200 ile Amphenicol Antibiyotik Kalıntılarının Tayini

Anahtar kelimeler:LCMS, amfenikol, gıda güvenliği, veteriner ilaç kalıntıları.

1Enstrüman ve Reaktörler

1.1 LCMS yapılandırma listesi

Tablo 1 Enstrüman konfigürasyonu listesi

1.3 Deney malzemeleri ve yardımcı ekipmanlar

Ultrasonik temizleyici

Döngü Karıştırıcı

Su banyosu azot buharlaştırıcısı

Yüksek hızlı santrifüj

2Deney yöntemleri

2.1 Çözüm Hazırlama

2.1.1 %2 Amonyatlı etil asetat çözeltisi: 4 ml amonyak suyu alın ve etil asetat ile 200 ml'ye kadar seyreltilsin.

2.1.2 % 4 Natriyum klorür çözeltisi: 4g Natriyum klorür alın, suda çözülün ve 100 ml'ye kadar seyreltilsin.

2.1.3 %4 Sodyum klorür doymuş n-heksan çözeltisi: Uygun miktarda %4 sodyum klorür çözeltisi alın, fazla n-heksan eklenir, karıştırılır, katman ayrımı için durulur.ve üst n-heksan katmanını al.

2.1.4 Karışık iç standart çalışma çözeltisi: Karışık iç standart stok çözeltisinin uygun miktarını alın.%20 metanol ile seyreltilerek kloramfenikol-D5 10ng/ml ve diğer iç standartlar (florfenikol-D3) elde edilir., tiamfenikol-D3 ve florfenikol amine-D3) her biri 50 ng/ml.

2.2 Örnek ön işleme

2.2.1 Örnek çıkarma: 2g örneği tartmak (±0,01g'e kadar doğru), 100μL karıştırılmış iç standart çalışma çözeltisi eklemek, 1 dakika boyunca girdap yapmak, 10mL% amonyumlu etil asetat çözeltisi eklemek,10 dakika boyunca girdap, 5 dakika boyunca 8000 rpm'de santrifuge edilir ve supernatant toplanır. Geri kalanına % 2 amonyumlu etil asetat çözeltisi 10 ml daha eklenir ve ekstraksiyon prosedürü tekrarlanır.İki süpernatantı birleştir., 50°C'de bir azot akışı altında kuruya kadar buharlaşır ve kullanmak için saklanır.

2.2.2 Örnek Temizleme: Temizlik kalıntısına 3 ml% 4 sodyum klorür çözeltisi eklenir, çözülmesi için girdap, daha sonra 5 ml% 4 sodyum klorür doymuş n-heksan çözeltisi eklenir, 30 saniye için girdap,8000 rpm'de 5 dakikalığına santrifüj, ve üst n-heksan tabakasını atın. yağsızlama işlemini bir kez tekrarlayın. % 2 amonyumlu etil asetat çözeltisinin 5 ml ekleyin, 10 dakika boyunca girdap, 8000 rpm'de 5 dakika boyunca santrifüjVe süpernatant toplamak. Geri kalanına % 2 amonyumlu etil asetat çözeltisi 5 ml daha ekleyin ve ekstraksiyon prosedürünü tekrarlayın. Üst-donanımları birleştirin, 50 °C'de bir azot akımı altında kurumaya kadar buharlaştırın,% 20 metanol çözeltisi 1 ml eklenir., 30'luk bir girdap, bir zardan filtrelenir ve enstrümantal analiz beklenir.

2.3 Deney koşulları

2.3.1 Sıvı Kromatografi Koşulları

Kromatografi sütunu: C18 1,7μm 2.1x50mm

Hareketli faz: A: Asetonitril; B: Suda 2 mM Amonyum Format

Akış hızı: 0.3mL/min

Sütun sıcaklığı: 40 °C

Enjeksiyon hacmi: 5μL

2.3.2 Kütle Spektrometri Koşulları

Tablo 3 İyon Kaynağı Parametreleri

3Deneyin sonucu.

3.1 Standart Kromatogram

Dört amid antibiyotik ve iç standartlarının belirlenmesi 6 dakika içinde tamamlandı.ve her bir bileşik tatmin edici bir yanıt gösterdi, deneysel gereksinimleri karşılıyor.

Şekil 1 4 Amfenikol Antibiyotik Kromatogramı ve İç Standart (Kloramfenikol 0.2ng/ml, Diğer Antibiyotikler 1ng/ml)

3.2 Doğrusal Aralık

Amit alkol karışımı standart çözeltinin uygun miktarını alın ve standart eğriyi hazırlamak için bir dizi konsantrasyonlara kadar aşamalı olarak seyreltilsin.İzotop iç standart yöntemi nicel analiz için kullanılmıştır.Doğrusal aralık, kloramfenikol için 0. 2 - 10 ng / ml ve florfenikol amine, tiamfenikol ve florfenikol için 1- 50 ng / ml idi.Doğrusal algılama sonuçları ile bilinen konsantrasyonlar arasındaki sapma, maksimum izin verilen sapmadan daha azdı., R2 değerleri 0,9958 ile 0 arasında değişmektedir.9998, tüm bileşenler için mükemmel doğrusallığı gösterir.

Tablo 4 Bileşiklerin Doğrusal Aralığı

Şekil 2 Dört bileşiğin kalibrasyon eğrisi verileri

3.3 LOD ve LOQ

Çin Ulusal Gıda Güvenliği Standartı GB 31658.20-2022 bu yöntem için kloramfenikol için algılama sınırı (LOD) 0,1μg/kg ve miktarlama sınırı (LOQ) 0 olduğunu belirtiyor.2μg/kg; Thiamphenicol, florfenicol ve florfenicol amine için LOD 0,5μg/kg ve LOQ 1 μg/kg'dır.Tüm hedef bileşikler için algılama sınırı (LOD) ve ölçüm sınırı (LOQ) belirtilen konsantrasyonlarda sinyal-gürültü oranları 3 ve 10'dan önemli ölçüde daha fazladır., ulusal standartta belirtilen hassasiyet gereksinimlerine uygun.

Tablo 5 Her bir bileşik için tespit ve ölçüm sınırları

Şekil 3 Dört bileşik için algılama sınırlarının ve ölçüm sınırlarının kromatogramları

3.4 Kesinlik Testleri

Düşük, orta ve yüksek konsantrasyonlarda amfenikol standart karışım çözeltisi alın ve tutma süresi ve zirve alanındaki sapmaları karşılaştırmak için ardışık altı enjeksiyon yapın.Sonuçlar aşağıdaki tablodadır.Tüm amfenikol bileşiklerinin tutma süresi sapmaları % 1' den azdı ve zirve alanı sapmaları % 5' den azdı.Ulusal standartta belirtilen RSD ≤ 15% doğruluk gereksinimini karşılayan.

Tablo 6 Her bir bileşik için hassasiyet testi

Şekil 4 Dört Amid Alkol Bileşiklerinin Hızlı Kromatogramları

3.5 Matrix Spiking Recovery Test

Bu tespit yönteminin doğruluğu, bir pik geri kazanım testi kullanarak değerlendirildi.Yüksek sıcaklıklarda matrisle örneği hazırlamakKarıştırılmış numunelerin her bir konsantrasyon seviyesi altı kez bağımsız olarak analiz edildi.Geri kazanım oranı, matrisdeki tespit edilen konsantrasyonun, ilave edilmeden önce ve sonra karşılaştırılarak hesaplandı.Sonuçlar şöyle gösteriliyor: Tavuk matrisinde, tüm bileşiklerin geri kazanım oranları% 94.5 ile% 107.2 arasında değişiyordu.Doğruluğun yöntem gereksinimlerini karşıladığını gösterir.

Tablo 6 Spiked Chicken Matrix'teki bileşiklerin geri kazanım oranları

3.6 Örnek testi

Süpermarketlerden rastgele satın alınan tavuk göğüs örnekleri, yukarıda belirtilen örnek ön işleme yöntemini kullanarak çıkarıldı ve arındırıldı.Dört amid antibiyotikten hiçbiri tespit edilmedi..

Şekil 5 Süpermarket Tavuk Göğüs Örneklerinde Dört Amit Alkol Bileşiklerinin Hromatogramı

4Sonuç.

Bu yöntem, hayvansal gıdalardaki amfenikol antibiyotiklerinin belirlenmesi için Wayeal LCMS-TQ9200 sıvı kromatografi kütle spektrometri sistemini kullanır.hem pozitif hem de negatif iyon modlarında bileşiklerin eşzamanlı olarak elde edilmesini sağlayanVeriler, yöntemin, kuyruğu olmayan iyi şekilli kromatografik zirveleri sağladığını ve hassasiyetinin ulusal standart gereksinimlerini karşıladığını göstermektedir.Doğrusal korelasyon katsayıları 0'dan büyük..99Altı ardışık enjeksiyonda tüm bileşikler için tutma süresi sapması% 1 içinde ve zirve alanı sapması% 5 içinde, iyi bir hassasiyeti göstermektedir.Tavuk matrisinde artan iyileşme oranları 94% 5 ila 107.2 arasında, % 5 içinde CV ile, doğruluğun metodolojik gereksinimleri karşıladığını göstermektedir.ve dört amfenikol antibiyotikten hiçbiri tespit edilmedi.Bu, Wayeal'in sıvı kromatografi-kütle spektrometri sistemine sahip olan yöntemin,Hedef numunelerin düzenli niteliksel ve niceliksel tespiti için gereksinimleri karşılar.