Waeal LCMS-TQ9200 LC-MS/MS Sistemi ile Yağlı Bitkilerde Birinci Grup Kanserojen olan Aflatoxin B1'in Belirlenmesi

Aflatoxin B₁yüksek toksik bir ikincil metabolittir. Aspergillus flavusAflatoxin ailesi arasında en güçlü toksisiteyi ve en geniş dağılımını gösterir.Hücre içi DNA ve RNA sentezini inhibe ederek ve protein metabolizmasına müdahale ederek toksik etkileri vardır., karaciğer üzerinde çok belirgin bir zararlı etkisi vardır.Okratoksin ve patulin gibi diğer mikotoksinlerle karşılaştırıldığında, aflatoxin B₁Çok toksiktir ve iyi bilinen bir kanserojenikliği vardır. Grup 1 kanserojenDünya Sağlık Örgütü (WHO) tarafından sıklıkla fıstık, mısır, fındık ve bitkisel yağlar gibi yağlı bitkilerde tespit edilir.Dünya çapında gıda güvenliği kontrolü için öncelikli bir kirleticidir.

Aflatoxin B ile kirlenme₁tipik olarak yağlı bitkiler ekim, hasat veya depolama sırasında mantar büyümesini teşvik eden yüksek sıcaklığa ve yüksek nemli koşullara maruz kaldığında ortaya çıkar.istikrarlı kimyasal özelliklerinden dolayıAflatoxin B₁Geleneksel pişirme sıcaklıklarında yok edilemez, bu da tarım ürünlerinde ve işlenmiş gıdalarda geri kalan sorunlarına yol açar.

Kısa süreli yüksek dozda alındığında, şiddetli karın ağrısı, kusma, sarılıq ve karaciğer yetmezliği gibi belirtilerle ortaya çıkan akut zehirlenmeye neden olabilir ve ciddi vakalarda ölümcül olabilir.Uzun süreli düşük doz maruz kalmak karaciğerde birikmeye neden olur., hepatik fibroz ve siroz gibi kronik karaciğer hasarına neden olur ve hatta birincil karaciğer kanserini tetikleyebilir.ve önceden mevcut karaciğer hastalıkları olan bireyler, aflatoxin B riski daha yüksektir.₁zehirlenme.

Çin'de, ulusal standart GB 2761-2017 (Ulusal Gıda Güvenliği Standartı) gıdalardaki mikotoksinlerin maksimum düzeyleri) aflatoxin B için maksimum kalıntı sınırlarını belirler.₁Farklı gıdalarda. GB 5009.22-2016 (Ulusal Gıda Güvenliği Standartı)Aflatoxin B'nin belirlenmesi için resmi analitik yöntemler sunar₁.

Bu başvuru notu, aflatoxin B'nin belirlenmesi için izotop seyreltilmesi sıvı kromatografi-tandem kütle spektrometri (LC-MS/MS) yönteminin oluşturulmasını tanımlar.₁Wayeal LCMS-TQ9200 LC-MS/MS sistemini kullanarak.

Anahtar kelimeler:Üçlü dört kutup; Aflatoxin B.₁Isotop seyreltme sıvı kromatografi-tandem kütle spektrometri.

1Enstrüman ve Reaktörler

1.1 Enstrüman konfigürasyonu

Tablo 1 Enstrüman konfigürasyonu listesi

1.2 Rejanlar ve Standartlar

Tablo 2 Rejanlar ve Standartlar

1.3 Deney malzemeleri ve yardımcı ekipmanlar

Döner karıştırıcı

Yüksek hızlı santrifüj

Analiz dengesi

Merkezci

Katı fazlı ekstraksiyon (SPE) koleksiyonu (vakum pompası ile)

Azot buharlaştırıcı

Şeker

2Deneyim Yöntemi

2.1 Çözüm Hazırlama

2.1.15 mmol/L Amonyum Asetat Çözümü:0.39 gram amonyum asetat ağırlığı, suda çözülür ve 1000 ml'ye kadar seyreltilir. İyice karıştırın.

2.1.1 Metanol-Asetonitril çözeltisi:100 ml metanolün içine 100 ml asetonitril ekleyin ve iyice karıştırın.

2.2 Örnek ön işleme

2.2.1 Örnek çıkarma

Buğday ununu 2 mm diyaframlı bir test ütüsünden geçirin. Örnekten 5 g'i (0.01 g'e kadar doğru) 50 mL santrifüj tüpüne tartın.μL izotop iç standart çalışma çözeltisi (100ng/mL), girdapla karıştırılıp 30 dakika bekletilir. Karıştırmak için 20mL metanol-su çözeltisi (70+30, v/v) eklenir, girdap,ve 20 dakikalığına bir yörüngel shaker üzerinde sallayın.6000 r/min hızında 10 dakika santrifuge edilir. Sonraki kullanım için süpernatant toplanır.

2.2.2 Örnek Temizlenmesi

4 ml süpernatantı bir kabına doğru aktarın, PBS'de %1 Triton X-100'ün 23 ml'ünü ekleyin ve iyice karıştırın.

Bağışıklık yakınlığı sütunundaki orijinal sıvı tamamen boşaldıktan sonra, yukarıdaki örnek çözeltisini 50 ml şırınga fıçısına aktarın.Akış hızı, örnekleme çözeltisinin sütundan 1 ¢3 mL/dakikada düzenli bir şekilde geçmesi için ayarlanır.Örnek çözeltisi tamamen boşaldıktan sonra, şırınga varisine 2 × 10 mL su ekleyin ve bağışıklık yakınlığı sütununu sabit bir akış hızı ile yıkayın.bir vakum pompası kullanarak sütunu kurut.

Vakum sistemini çıkarın. 10 ml'lik bir test tüpünü bağışıklık yakınlığı sütunun altına koyun, 50 ml'lik şırınga fıçı çıkarın.ve sütunu kontrol edilen bir akış hızı ile elüte etmek için 2 × 1 mL metanol ekleyin 1 ′′3 mL/min. Daha sonra sütunu bir vakum pompası kullanarak tekrar kurutun. Tüm eluatı test tüpüne toplayın.50 °C'de bir azot akımı altında, elüyatı hafifçe kuruya kadar buharlaştırın. Geri kalanı çözmek için başlangıçta hareketli fazın 1 ml'ini ekleyin, 30 saniye boyunca girdap. 0.22 μm zar filtresi, ve filtratı bir sonraki enjeksiyon için bir oto numuneci şişeye toplayın.

2.3 Deneyin koşulları

2.3.1 Sıvı kromatografi yöntemi

Sütun: C18, 1.7μM, 2.1- Evet.50 mm

Hareketli aşama aşaması: A: Metanol-asetonitril çözeltisi; B aşaması: 5mmol/L amonyum asetat çözeltisi

Akış Hızı: 0.3 mL/dakika

Sütun sıcaklığı: 40°C

Enjeksiyon hacmi: 3μL

2.3.2 Kütle Spektrometri Metodu

Tablo 3 Bileşik Kütle Spektrometri Parametreleri

Not: Yıldız (*) miktarsal iyonu gösterir.

3Deneyin sonucu.

3.1 Standart Kromatogram

Aflatoxin B belirlenmesi₁ve izotop iç standardı 13C17-aflatoxin B₁Şekil 1'de gösterildiği gibi, her iki analitik mükemmel zirve şekilleri ve tatmin edici yanıtlar gösterdi ve deneysel analiz için gereksinimleri karşıladı.

Şekil 1 Aflatoxin B kromatogramları₁ve İzotop İç Standart 13C17- Hayır.-Aflatoxin B₁

3.2 Doğrusal Aralık

An appropriate volume of the standard stock solution and mixed isotope internal standard working solution were accurately transferred and diluted with the initial mobile phase to prepare a series of standard working solutions with aflatoxin B₁Her bir çözeltinin içinde 2ng/mL konsantrasyonunda izotop iç standardı vardı. Bu standartları kullanarak bir kalibrasyon eğrisi oluşturuldu.0'nun doğrusal aralığında.5- Evet.50ng/mL ve 13C 17-aflatoxin B kullanılarak düzeltildikten sonra₁İç standart olarak, ölçülen ve nominal aflatoxin B arasındaki sapmalar₁Dolayısıyla, bu değerler, en fazla izin verilen sapma sınırları içindeydi.999, mükemmel doğrusallığı gösterir.

Şekil 2 Aflatoxin B Standart Eğri₁

3.3 Tekrarlanabilirlik

Standart çözeltiler üç konsantrasyonda (1, 10 ve 20 ng/mL) altı kez ardı ardına enjekte edildi.Aflatoxin B için tutma zamanlarının ve numune miktarlarının göreceli standart sapmaları (RSD)₁Düşük, orta ve yüksek konsantrasyonlarda tümü %5 içinde deneyin gereksinimlerini karşıladı.

Tablo 4 Aflatoxin B için tekrarlanabilirlik testi₁Düşük, Orta ve Yüksek Konsantrasyonlarda

3.4 Spike kurtarma

Aflatoxin B₁Dolayısıyla, testin sonucunda 5ng/mL'lik bir konsantrasyon elde edilmesi için numuneye standart bir çözeltme eklendi.147ng/ml, RSD'si 1.954%. hesaplanan kurtarma oranı 102.94% idi ve deneyin gereksinimlerini karşıladı.

3.5 Boş Kalıntı

20 ng/mL standart çözeltinin sürekli enjekte edilmesinden sonra, daha sonra bir boş numune enjekte edildi.

Şekil 3 Bileşenin Boş Hromatogramı

3.6 Örnek testi

Aflatoxin B₁A örneğinde (Şekil 4) tespit edilmemiştir.

Şekil 4 Aflatoxin B kromatogramı₁A örneğinde

4Sonuç.

Bu çalışmada, aflatoxin B'nin belirlenmesi için izotop seyreltme sıvı kromatografi-tandem kütle spektrometri (LC-MS/MS) yöntemi kullanıldı.₁Wayeal LCMS-TQ9200 sıvı kromatografi-tandem kütle spektrometri sistemi kullanılarak belirlendi.Alınan veriler, tüm kromatografik zirvelerin kuyruğu olmayan iyi zirve şekilleri gösterdiğini göstermektedir.Duyarlılık deneysel gereksinimleri karşılar ve korelasyon katsayısı (R) 0'dan büyüktür.999Düşük, orta ve yüksek konsantrasyonlarda tekrar edilebilirlik % 5'in içinde ve yüksek konsantrasyonlu numune enjeksiyonundan sonra sistem taşımacılığı görülmez.Bu sonuçlar, yöntemin, Wayeal sıvı kromatografi-tandem kütle spektrometri sistemi ile donatıldığında, hedef numunelerin rutin nitelikli ve nicel analizi için gereksinimleri karşılar.